CÁC PHƯƠNG PHÁP PHỔ BIẾN NHẤT ĐỂ ĐẾM TẾ BÀO

Nhiều nghiên cứu yêu cầu đếm tế bào trước khi bắt đầu thí nghiệm. Điều này có thể cần thiết, ví dụ, để chuẩn hóa nồng độ tế bào giữa các mẫu nhằm giảm thiểu sai sót và sự biến động trong các kết quả tiếp theo.

Phương pháp phổ biến nhất để đếm tế bào là sử dụng kính hiển vi và buồng đếm hồng cầu. Những tiến bộ trong công nghệ hình ảnh đã cho phép tự động hóa việc đếm tế bào, mang lại độ chính xác và độ tin cậy được cải thiện mà tốn ít thời gian và công sức hơn. Thật không may, nhiều phòng thí nghiệm đã không thể triển khai máy đếm tế bào tự động. Máy đếm tế bào tự động Invitrogen Countess 3 được phát triển để loại bỏ một số rào cản khi chuyển sang máy đếm tế bào tự động. Một so sánh các phương pháp đếm tế bào được trình bày ở đây.

Sự thay đổi do tính chủ quan

Sự phụ thuộc vào đánh giá của người vận hành, bất kể phương pháp đếm tế bào nào, đều góp phần gây ra sai số trong kết quả. Cường độ ánh sáng và cài đặt tiêu cự trên kính hiển vi và một số máy đếm tế bào tự động mang tính chủ quan và do đó có thể dẫn đến sự thay đổi. Người vận hành cũng phải xác định những đối tượng nào cần bao gồm và loại trừ trong số lượng tế bào. Nếu đo độ sống chết, người vận hành phải quyết định tế bào nào sẽ được tính là “chết” hay “sống”. Do đó, số lượng các biến chủ quan trong quá trình đếm thủ công có thể dẫn đến sự khác biệt lớn về kết quả giữa các người vận hành.

Các công cụ của Countess 3 có thể loại bỏ nhiều biến số chủ quan này, đồng thời tiết kiệm thời gian. Máy đếm tế bào Countess 3 sử dụng thuật toán phức tạp để xác định tiêu điểm và cường độ ánh sáng tối ưu. Khả năng phân chia các tế bào dựa trên kích thước, độ sáng và độ tròn dẹt của tế bào bằng cách sử dụng các phép đo định lượng thay vì phán đoán của người vận hành cũng giúp giảm sai sót do tính chủ quan và cho phép tăng khả năng lặp lại giữa mẫu và người dùng (Hình 1).

Hình 1. Kết quả và độ biến thiên giữa buồng đếm hồng cầu và máy đếm tế bào tự động Countess 3 FL. Các mẫu tương đồng của tế bào CHO K1, HeLa, HEK293, Jurkat và PBMC được đếm 6 lần bằng Countess 3 FL, sau đó đếm bằng buồng đếm hồng cầu và kính hiển vi. Độ chính xác và độ biến thiên của máy Countess 3 đều tốt hơn so với buồng đếm hồng cầu

Số lượng tế bào được đếm và vùng đếm tế bào

Trong thực tế, nhiều nhà nghiên cứu không đếm đủ số lượng tế bào đại diện cho quần thể, dẫn đến số lượng tế bào không đáng tin cậy với độ lệch chuẩn cao. Để tiết kiệm thời gian trong quá trình đếm thủ công, nhiều người dùng chỉ đếm một hoặc hai ô vuông trên lưới của buồng đếm hồng cầu truyền thống. Việc đếm nhiều ô vuông hơn (tức là diện tích lớn hơn) thường sẽ mang lại kết quả nhất quán hơn nhưng phải mất thêm thời gian. Máy đếm tế bào tự động của Countess 3 thẩm vấn tương đương với gần bốn ô vuông của máy đo huyết cầu truyền thống trong thời gian đếm 10 giây, do đó tăng tính nhất quán khi đếm bằng cách giảm ảnh hưởng của sự biến đổi phân bố tế bào (Hình 2).

Hình 2. Vùng đếm tế bào của máy Countess 3. Vùng đếm của slide đếm tế bào máy đếm tế bào tự động Countess 3 so với vùng đếm của buồng đếm hồng cầu truyền thống.

Độ lặp lại

Bất kể phương pháp đếm tế bào nào, có thể giảm được phương sai bằng cách thực hiện đếm nhiều tế bào cho một mẫu. Một số bản sao có thể được phân tích trên thiết bị Countess 3 trong khoảng thời gian cần thiết để thực hiện một lần đếm bằng buồng đếm hồng cầu (tối đa 5 phút). Điều này giúp tăng độ chính xác và độ tin cậy của kết quả, vì thường tránh lặp lại khi sử dụng các phương pháp đếm thủ công tẻ nhạt do hạn chế về thời gian, đặc biệt khi phải đếm nhiều mẫu tế bào.

Các cụm tế bào

Việc thu được kết quả chính xác từ các mẫu chứa nhiều cụm tế bào có thể khó khăn khi đếm tế bào thủ công cũng như với một số máy đếm tế bào tự động. Một thách thức chung với việc đếm các cụm tế bào là khả năng phân biệt ranh giới giữa các tế bào để xác định số lượng tế bào chứa trong một cụm. Một số máy đếm tế bào tự động được giới hạn ở việc chỉ đếm chính xác các cụm từ năm tế bào trở xuống. Các thuật toán đếm nâng cao của thiết bị Countess 3 có thể xác định rõ ràng ranh giới tế bào ngay cả trong các cụm tế bào phức tạp, dẫn đến số lượng tế bào chính xác (Hình 3).

Hình 3. Số lượng tế bào chính xác, ngay cả với các cụm tế bào. Các thuật toán phân đoạn và đếm của máy đếm tế bào Countess 3 có thể phân giải các cụm tế bào trong mẫu tế bào NIH/3T3 này.

Giá cả

Yếu tố chính dẫn đến sự miễn cưỡng trong việc áp dụng phương pháp đếm tế bào tự động là chi phí liên tục của các tiêu bản dùng một lần, độc quyền được yêu cầu với các hệ thống tự động. Buồng đếm tế bào dùng để đếm tế bào thủ công có thể được rửa sạch và tái sử dụng vô thời hạn. Máy đếm tế bào tự động Countess 3 FL được thiết kế để hoạt động với một lam kính có thể tái sử dụng (Hình 5) nhằm giúp giảm đáng kể chi phí nhưng cũng hoạt động với các lam kính dùng một lần tiện lợi. Sự đổi mới này giờ đây giúp các phòng thí nghiệm có thể kết hợp phương pháp đếm tế bào ưu việt này với giá cả phải chăng mà không phải trả chi phí liên tục cho vật tư tiêu hao liên quan đến các máy đếm tế bào tự động khác.

Figure 5. Slide đếm có thể tái sử dụng của Máy đếm tế bào tự động Countess 3 FL giúp giảm chi phí vật tư tiêu hao.

Tiết kiếm thời gian

Thời gian bổ sung để đếm tế bào theo cách thủ công (tối đa 5 phút) so với việc đếm bằng máy đếm tế bào tự động của Countess 3 (10 giây) thường bị bỏ qua. Một cá nhân đếm năm slide mỗi ngày (hai mẫu trên mỗi slide) có thể tiết kiệm ~10 giờ mỗi tháng bằng cách chuyển sang bộ đếm tự động với một slide có thể tái sử dụng. Thời gian tiết kiệm được tăng lên ~15 giờ mỗi tháng khi sử dụng các lam kính dùng một lần (Hình 6). Thời gian bổ sung này có thể được áp dụng cho các hoạt động khác trong phòng thí nghiệm, mang lại lợi thế đáng kể khi chuyển từ đếm tế bào thủ công sang đếm tế bào tự động.

Figure 6. Số giờ tiết kiệm ước tính mỗi tháng khi chuyển từ đếm tế bào thủ công sang sử dụng máy đếm tế bào tự động.

Thông tin thu thập được

Thông tin có thể thu được bằng buồng đếm hồng cầu chỉ được giới hạn ở tổng số tế bào, số lượng tế bào sống và số lượng tế bào chết có trong mẫu. Dữ liệu bổ sung có thể thu được bằng máy đếm tế bào tự động bao gồm kích thước tế bào trung bình và biểu đồ hiển thị sự phân bố của tế bào dựa trên cường độ huỳnh quang hoặc kích thước tế bào sống và chết. Với thiết bị Countess 3, thông tin thu thập được có thể được lưu dưới dạng tệp CSV vào ổ USB để phân tích thêm. Hình ảnh thô cũng như màn hình kết quả cũng có thể được lưu vào ổ USB và chuyển sang máy tính. Thêm vào đó, Countess 3 tương thích với 21 CFR part 11 để giúp bảo toàn dữ liệu

Tổng kết

Lợi ích của việc đếm tế bào tự động so với đếm tế bào thủ công đã được ghi chép đầy đủ và bao gồm độ chính xác cao hơn, quy trình làm việc đơn giản hóa và tiết kiệm thời gian đáng kể. Chi phí của các tiêu bản dùng một lần là rào cản đối với việc áp dụng phương pháp đếm tế bào tự động bất chấp những lợi ích này. Khả năng sử dụng một slide có thể tái sử dụng với Máy đếm tế bào tự động Countess 3 FL đã giảm chi phí liên quan đến việc đếm tế bào tự động, giúp nó có sẵn cho các phòng thí nghiệm có thể không đủ khả năng mua công nghệ tiên tiến này cho phép đếm nhanh hơn và kết quả chính xác hơn.

--------------------------------------------

CÔNG TY TNHH PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VITECH

Hotline: 024.3783.5922 | 028.3517.0468

www.vitechltd.vn | www.vitechshop.vn

VP HÀ NỘI: Số 6 Lô 1D Khu Đô thị Trung Yên Trung Hòa, Cầu Giấy, Hà Nội

VP HỒ CHÍ MINH: Số 5 đường 13 KDC Miếu Nổi, Phường 3, Quận Bình Thạnh, TP. HCM